ALL libraries (COBIB.SI union bibliographic/catalogue database)
13.
Uporaba bakteriofagnih litičnih proteinov holina in endolizina za povečano sproščanje rekombinantnih proteinov iz Lactococcus lactis NZ9000 = The use of bacteriophage lytic proteins holin and endolysin for increased release of recombinant proteins from Lactococcus lactis NZ9000 : magistrski študijski program Industrijska farmacija
Repar, Lara
Lactococcus lactis je varna mlečnokislinska bakterija, ki se uporablja kot gostiteljski organizem za izražanje terapevtsko pomembnih rekombinantnih proteinov. Pri uporabi mlečnokislinskih bakterij je ...ključna sposobnost sproščanja rekombinantnih proteinov iz celic. Za doseganje izločanja heterolognih proteinov se pri bakteriji Lactococcus lactis uporablja signalni peptid endogenega proteina Usp45. Prisotnost signalnega peptida je bistvena za izločanje, ki pa pogosto ni učinkovito. V okviru magistrskega dela smo vzpostavili sistem, ki temelji na izražanju aktivnih litičnih proteinov holina in endolizina endogenega laktokoknega bakteriofaga in omogoča povečano sproščanje rekombinantnih proteinov iz mlečnokislinske bakterije Lactococcus lactis NZ9000. Bakteriofagni litični protein holin v celični membrani tvori pore, ki omogočajo prehod snovi preko citoplazemske membrane. En izmed ključnih proteinov, ki ob tem preidejo celično membrano, je litični protein endolizin, ki hidrolizira peptidoglikansko celično steno. Njuno izražanje poveča permeabilnost celične membrane in razgradnjo celične stene, kar omogoča sproščanje znotrajceličnih proteinov. Za vrednotenje novorazvite metode smo pripravili genske konstrukte za sočasno izražanje litičnih proteinov z modelnim rekombinantnim proteinom celulazo, za katerega vemo, da se ne izloča učinkovito iz bakterije Lactococcus lactis. Sistem smo ovrednotili z analizo prisotnosti proteinov v celičnih lizatih in analizo sproščanja znotrajceličnih proteinov v gojišče s poliakrilamidno gelsko elektroforezo v prisotnosti denaturanta ter imunodetekcijo na membrani. Izkazalo se je, da je bilo sproščanje znotrajceličnih proteinov bistveno povečano po izražanju holina. Povečano sproščanje celulaze ob soizražanju holina smo potrdili tudi posredno z analizo sproščanja celulaze na karboksimetil celuloznih ploščah. Z analizo rasti bakterije Lactococcus lactis po izražanju litičnih proteinov smo ugotovili, da sta oba litična proteina vplivala na rast celic in podaljšala lag fazo rasti, medtem ko smo zmanjšano živost opazili le po izražanju holina. Kljub negativnemu vplivu na živost ima razviti sistem povečanega sproščanja rekombinantnih proteinov velik potencial za uporabo v biotehnologiji mlečnokislinskih bakterij.
Type of material - master's thesis
; adult, serious
Publication and manufacture - Ljubljana : [L. Repar], 2024
It was not necessary to add the material to the shelf.
Bibliographic material was successfully added on shelf.
Adding bibliographical material on shelf was not successful.
Material is already on the shelf.
Permalink
URL:
Impact factor
Access to the JCR database is permitted only to users from Slovenia. Your current IP address is not on the list of IP addresses with access permission, and authentication with the relevant AAI accout is required.
Year
Impact factor
Edition
Category
Classification
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
Impact factor
Select the library membership card:
DRS,
in which the journal is indexed
Database name
Field
Year
Links to authors' personal bibliographies
Links to information on researchers in the SICRIS system
Subject headings in COBISS General List of Subject Headings
Select pickup location
The material from the parent unit is free. If the material is delivered to the pickup location from another unit, the library may charge you for this service.
