ALL libraries (COBIB.SI union bibliographic/catalogue database)
13.
Spremljanje fenotipskih sprememb fibroblastov z optično mikroskopijo = Monitoring the phenotypic changes of fibroblasts by optical microscopy : magistrski študijski program Laboratorijska biomedicina
Zupančič, Matic, farmacevt
Fibroza je zapletena kronična bolezen, do katere lahko pride v številnih tkivih po njihovi poškodbi. Ključen uvodni dogodek v celjenju poškodb ali nastanku fibroze je aktivacija fibroblastov in ...njihova posledična diferenciacija do svoje funkcionalne oblike, miofibroblasta. Fibroza je tudi pogosta posledica izpostavljenosti nanodelcem v onesnaženem zraku. Nanodelcev po inhalaciji zdrava pljuča niso zmožna odstraniti, kar privede do kopičenja v alveolih. Ta lastnost, v kombinaciji s svojo veliko površino in visoko reaktivnostjo le-te, privede do kroničnega vnetja pljuč in aktivacije fibroblastov v njih že po enkratni izpostavitvi nanodelcem. Ti so močno heterogeni, tako v reaktivnosti njihove površine kot v velikosti in obliki, zaradi česar je potrebno v namen zagotavljanja varnosti opredeliti sposobnost proženja vnetja oziroma fibroze za posamezne nanodelce. S tem namenom smo razvili metodo z uporabo konfokalne mikroskopije, ki nam omogoča spremljanje fenotipskih sprememb živih fibroblastov in s tem zaznavo diferenciacije do miofibroblastov kot rezultat izpostavitve različnim dejavnikom. Uporabili smo celično linijo MLg kot in vitro model pljučnih fibroblastov, v katerih smo fluorescenčno označili jedro, membrane in aktin. Kot pozitivno kontrolo za aktivacijo fibroblastov smo izbrali tkivni rastni faktor beta (TGF-β1). Po določitvi ustreznih koncentracij vseh fluorescenčnih sond smo določili minimalni čas po izpostavitvi TGF-β1, pri katerem je prišlo do statistično signifikantne razlike med negativno in pozitivno kontrolo ter ustrezno podlago stekla, prevlečenega s kolagenom I, na katero smo nacepljali celice MLg. Spremljali smo številne fenotipske značilnosti celic, predvsem razlike v njih med negativno in pozitivno kontrolo, naredili izbor največkrat opaženih spremenljivk: prisotnost stresnih vlaken, vidni fokalni adhezijski kompleksi (FAK), površina celice, dvojedrnost, “izrastki” (lamele), prisotnost tankih izrastkov oziroma nitk. Izmed vseh v naboru sta se izkazali za najbolj občutljivi spremenljivki prisotnost FAK in površina celice oziroma povečanje le-te. V namen čim lažje avtomatizacije metode smo se odločili, da spremljamo le razlike v površini celice. S spremljanjem površine celice smo po dodatku TGF-β1 opazili pojav druge populacije celic z večjo površino, s čimer smo ovrednotili TGF-β1 kot primeren dodatek za pozitivno kontrolo. Nato smo izvedli triplikat bioloških ponovitev eksperimenta z negativno in pozitivno kontrolo ter nanomateriali MWCNT401, TiO2NT in »Diesel«. Dobljeni rezultati nakazujejo, da izpostavitev fibroblastov nanodelcem in vitro ni dovolj za njihovo diferenciacijo v miofibroblaste. Postavljeno metodo spremljanja fenotipskih sprememb kot posledica izpostavitvi nanodelcem bi lahko z vključitvijo predlaganih izboljšav razvili do validirane metode za napoved nastanka fibroze oziroma opredelitve toksičnosti različnih nanodelcev v pljučih. Predlagana metoda bi omogočala hitrejše in cenejše napovedovanje vpliva nanodelcev na razvoj fibroze pljuč ter hkrati zmanjšala potrebo po testnih živalih v te namene.
Type of material - master's thesis
; adult, serious
Publication and manufacture - Ljubljana : [M. Zupančič], 2024
No library within the COBISS.SI system holds a copy of this material.
Shelf entry
Adding material to shelf was successful.
Adding material to shelf failed.
It was not necessary to add the material to the shelf.
Bibliographic material was successfully added on shelf.
Adding bibliographical material on shelf was not successful.
Material is already on the shelf.
Permalink
URL:
Impact factor
Access to the JCR database is permitted only to users from Slovenia. Your current IP address is not on the list of IP addresses with access permission, and authentication with the relevant AAI accout is required.
Year
Impact factor
Edition
Category
Classification
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
Impact factor
Select the library membership card:
DRS,
in which the journal is indexed
Database name
Field
Year
Links to authors' personal bibliographies
Links to information on researchers in the SICRIS system
Subject headings in COBISS General List of Subject Headings
Select pickup location
The material from the parent unit is free. If the material is delivered to the pickup location from another unit, the library may charge you for this service.
