ALL libraries (COBIB.SI union bibliographic/catalogue database)
  • Vrednotenje nanoteles za usmerjanje filamentnega bakteriofaga na receptor dendritičnih celic Clec9A [Elektronski vir] = Evaluation of nanobodies for targeting filamentous bacteriophage to the dendritic cell receptor Clec9A : enoviti magistrski študij farmacije
    Cerovšek, Karin
    Cepljenje predstavlja najučinkovitejši način preprečevanja nalezljivih bolezni, v zadnjih letih pa prihaja tudi do znatnega napredka na področju terapevtskih cepiv proti raku. Učinkovito cepivo ... vzbudi tako prirojeni kot pridobljeni imunski odgovor in privede do dolgotrajne stimulacije celičnega in humoralnega pridobljenega imunskega sistema, kar je pri terapevtskih cepivih še posebej pomembno. Projekt, katerega del je raziskava v okviru pričujoče magistrske naloge, je usmerjen k razvoju cepilnega sistema na osnovi filamentnega bakteriofaga. Bakteriofag služi kot nosilec antigenov ter izkazuje intrinzično adjuvantne lastnosti. Ker so dendritične celice ključni element pri sprožitvi pridobljenega imunskega odziva, lahko s ciljanjem le-teh izboljšamo T-celični odziv. V okviru magistrske naloge smo se osredotočili na izbor nanoteles kot ligandov receptorja Clec9A za kasnejšo tarčno dostavo filamentnih bakteriofagov do dendritičnih celic. Clec9A je član lektinom-podobnih receptorjev tipa C, izražen na dendritičnih celicah in sodeluje pri privzemu antigenov in njihovem usmerjanju v zgodnje fagosomske razdelke. Ciljanje Clec9A predstavlja strategijo za okrepitev navzkrižne predstavitve in indukcijo imunskega odgovora, posredovanega s citotoksičnimi limfociti T, pride pa tudi do močnega humoralnega odgovora, povezanega z nastankom folikularnih celic T pomagalk. Zaradi velikostne omejitve neposredne predstavitve ligandov na kapsidnem proteinu pIII filamentnega bakteriofaga smo uporabili pristop posredne predstavitve s pomočjo konjugacijskega sistema avtokatalitičnega razcepljenega proteina SnoopTag/SnoopCatcher. Šest nanoteles (N1-N6) smo izrazili v obliki fuzije s proteinom SnoopCatcher v periplazmi celic Escherichia coli. Izrazili smo tudi bakteriofage f88KE, ki omogočajo dvojno predstavitev na kapsidnih proteinih pIII in pVIII ter za naš namen na pIII predstavljajo peptid SnoopTag. S prenosom western smo potrdili nastanek stabilne izopeptidne vezi med peptidom SnoopTag na površini bakteriofaga in fuzijskim proteinom SnoopCatcher-nanotelo. Vezavno afiniteto konjugatov nanoteles in fagov do rekombinante ektodomene mišjega Clec9A smo ocenili z encimskoimunskim testom. Z encimskoimunskim testom in bioplastno interferometrijo smo ovrednotili tudi vezavo prostih nanoteles na Clec9A. Pokazali smo, da N2 izkazuje najvišjo afiniteto do mišjega Clec9A. Nanj se vežeta tudi N1 in N3, ostala nanotelesa pa se na receptor niso vezala. Nanotelo N2 bomo uporabili v nadaljnjih študijah, usmerjenih v vrednotenje internalizacije konjugiranih bakteriofagov v dendritične celice ter indukcije imunskih odzivov.
    Type of material - master's thesis ; adult, serious
    Publication and manufacture - Ljubljana : [K. Cerovšek], 2025
    Language - slovenian
    COBISS.SI-ID - 230402563

    Link(s):

    https://repozitorij.uni-lj.si/IzpisGradiva.php?id=168031

Shelf entry