VSE knjižnice (vzajemna bibliografsko-kataložna baza podatkov COBIB.SI)
  • Izdelava strategije izolacije in renaturacije podaljšane oblike rekombinantnega humanega limfotoksina alfa (LT-▫$\alfa$▫)
    Repnik, Katja ...
    Izdelali smo strategijo za izolacijo podaljšane oblike rekombinantnega humanega limfotoksina alfa (LT-f ). S pomočjo tehnologije rekombinantne DNA je bil predhodno pripravljen rekombinantni sev ... bakterije E. coli, ki izraža humani limfotoksin alfa s histidinskim podaljškom na N-terminalnem koncu molekule. Večina rekombinantnega proteina se je izločala v obliki inkluzijskih teles, zato smo le-ta raztopili v visoki koncentraciji denaturanta, in sicer v 8 M urei in 6 M gvanidinijevem hidrokloridu (Gdn-HCl).Pri tem smo protein popolnoma denaturirali. Kot glavno kromatografsko stopnjo za izolacijo proteina smo uporabili kovinsko kelatno afinitetno kromatografijo (IMAC), z Ni-NTA nosilcem, ki je specifičen za vezavo proteinov s številnimi zaporednimi histidinskimi ostanki. Protein se je v denaturirani obliki vezal na nosilec. Elucijo smo izvedli s pufrom, kateremu smo dodali EDTA. Renaturacijo denaturiranega proteina smo izvedli z zamenjavo pufra, redčenjem v renaturacijskem pufru in renaturacijo na koloni. Najboljše rezultate smo dosegli z redčenjem v pufru, ki je vseboval 2 M ureo in 1 M nemicelarni sulfobetain NDSB 201. Uspešnost renaturacije smo kontrolirali z merjenjem biološke aktivnosti.
    Vir: Slovenski kemijski dnevi 2006, Maribor, 21. in 22. september 2006 [Elektronski vir] (6 str.)
    Vrsta gradiva - prispevek na konferenci
    Leto - 2006
    Jezik - slovenski
    COBISS.SI-ID - 10755094

Vnos na polico